一、培養(yǎng)體系問題
1、檢查細胞是否存在污染。
(1)如果培養(yǎng)細胞時未添加抗生素，細胞污染則是不可避免的。
①用肉眼和顯微鏡進行檢查。
②如果細胞被污染則要棄掉。
(2)支原體污染不易察覺，因此需要進行定期檢測。
(3)檢查可能造成污染的途徑和原因。
2、檢查用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基和血清(例如批次廠商是否相同)。
3、如果排除問題與培養(yǎng)基無關，那么可能還是細胞存在問題。
(1)復蘇另一支凍存的細胞，與正在培養(yǎng)的細胞進行比較。但是需要注意的是兩種細胞的培養(yǎng)應分開，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按步驟(2)～(4)的方法做排查。
(2)對傳代培養(yǎng)的細胞進行計數(shù)，并繪制生長曲線，與前面培養(yǎng)該細胞的資料進行比較，檢查是否存在如下改變：
①傳代時是否存在接種密度過低的情況。
②細胞傳代是否過于頻繁。
③傳代前細胞平臺期是否過長。
(3)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批次，檢查供應商和批次。
(4)細胞分離過程中是否出現(xiàn)嚴重損傷細胞的情況：
①胰蛋白酶(或其他消化試劑)的消化時間是否過長。
②消化液的濃度和活性是否過高、過強。
③胰蛋白酶消化時，孵箱溫度是否正常。
④吹打消化細胞時是否過于用力。
⑤如果添加了EDTA，那么細胞是否對 EDTA過于敏感。
⑥胰蛋白酶稀釋是否正確。
⑦胰蛋白酶消化液是否還在有效期內(nèi)。
二、檢查公用設備和試劑
1、孵箱溫度設定不準
a、自動調溫器損壞。
b、開關孵箱門過于頻繁。
c、孵箱門未關緊。
d、風扇損壞造成散熱不均。
2、孵箱濕度不能維持
a、水盤中未加水。
b、孵箱有滲漏。
c、開關孵箱門過于頻繁。
d、在培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱重，以檢查蒸發(fā)率。
3、孵箱的CO2濃度不準
a、開關孵箱門過于頻繁。
b、CO2控制器出現(xiàn)問題。
